九、鸭病毒性肠炎

鸭病毒性肠炎（Duck virus enteritis，DVE）又名鸭瘟，是由鸭瘟病毒引起的鸭等雁形目禽类的一种急性、败血性及高度致死性传染病。临诊上以发病快、传播迅速、发病率和病死率高，部分病鸭肿头流泪、食道黏膜出血及坏死、肝脏出血或坏死等为主要特征。该病给世界养鸭业造成了巨大的经济损失。OIE将其列入B类传染病，我国将其列为二类疫病。

该病于1923年在荷兰首次报道，1967年在美国东海岸流行，几乎呈全球性分布，我国于1957年在广州首先发现该病。

（一）病毒特征

鸭瘟病毒（Duck plague virus），又称鸭疱疹病毒Ⅰ型（Anatid herpesvirus），系疱疹病毒科的成员，具有疱疹病毒的典型形态结构。有囊膜，病毒粒子呈球形或椭圆形，直径80～160nm，有的成熟病毒粒子可达300nm。在感染细胞制备的超薄切片中，电镜下可见细胞核内病毒粒子约90nm，胞浆内病毒粒子约160nm。该病毒对乙醚、氯仿敏感，在37℃下经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及脂肪酶处理18h可使该病毒部分失活或完全失活。

该病毒只有一个血清型，但不同毒株的毒力有差异。病毒适于在8～14日龄鸭胚及鸭胚成纤维细胞单层（DEF）增殖传代，一般接种3～5d致死鸭胚，死亡胚胎呈广泛性出血、肝脏有特征性坏死灶，部分胚绒毛尿囊膜水肿、出血、增厚。在成纤维细胞单层中，接毒3～6d可出现细胞病变（CPE）。经过鸭胚或鸭胚成纤维细胞多次连续传代后的病毒，接种鹅胚、鸡胚或其成纤维细胞单层也能很好地增殖。

鸭瘟病毒具有广泛的组织嗜性，在病（死）鸭脏器、血液、分泌物及排泄物中均含有病毒，但以肝、脾、脑、食道、泄殖腔的含毒量最高。

鸭瘟病毒对外界环境抵抗力较强，在22℃条件下其感染力可维持30d，－7～－5℃时可存活3个月；但50℃ 90～120min、56℃ 30min、60℃ 15min、80℃ 5min均可破坏病毒的感染性。在pH 5.0～9.0环境中较稳定，经6h其毒力不降低；在pH3.0以下或pH11.0以上的环境中很快被灭活。对一般常用消毒剂敏感。

（二）临床症状

自然感染的潜伏期3～5d，人工感染的潜伏期为2～4d。病初体温升高达43℃以上，高热稽留。病鸭表现精神委顿，头颈缩起，羽毛松乱，翅膀下垂，两脚麻痹无力，伏坐地上不愿移动，强行驱赶时常以双翅扑地行走，走几步即行倒地。病鸭不愿下水，驱赶入水后也很快挣扎回岸。病鸭食欲明显下降，甚至停食，渴欲增加。病鸭的特征性症状为流泪和眼睑水肿。病初流出浆液性分泌物，使眼睑周围羽毛沾湿，而后变成黏稠或脓样，常造成眼睑粘连、水肿，甚至外翻，眼结膜充血或小点出血，甚至形成小溃疡。病鸭鼻中流出稀薄或黏稠的分泌物，呼吸困难，并发生鼻塞音，叫声嘶哑，部分鸭见有咳嗽。病鸭发生泻痢，排出绿色或灰白色稀粪（图1-33），肛门周围的羽毛被沾污或结块。肛门肿胀，严重者外翻，翻开肛门可见泄殖腔充血、水肿、有出血点，严重病鸭的黏膜表面覆盖一层假膜，不易剥离。部分病鸭在疾病明显时期，可见头和颈部发生不同程度的肿胀（图1-34），触之有波动感，俗称“大头瘟”。

（三）病理变化

病变的特点是出现急性败血症，全身小血管受损，导致组织出血和体腔溢血（图1-35），尤其消化道黏膜出血和形成假膜或溃疡，淋巴组织和实质器官出血、坏死。食道与泄殖腔的疹性病变具有特征性。食道黏膜有纵行排列呈条纹状的黄色假膜覆盖或小点出血（图1-36），假膜易剥离并留下溃疡斑痕。泄殖腔黏膜病变与食道相似，即有出血斑点和不易剥离的假膜与溃疡。食道膨大部分与腺胃交界处有一条灰黄色坏死带或出血带，肌胃角质膜下层充血和出血。肠黏膜充血、出血，以直肠和十二指肠最为严重。位于小肠上的4个淋巴出现环状病变，呈深红色，散布针尖大小的黄色病灶，后期转为深棕色，与黏膜分界明显。胸腺有大量出血点和黄色病灶区，在其外表或切面均可见到。雏鸭感染时法氏囊充血发红，有针尖样黄色小斑点，到后期，囊壁变薄，囊腔中充满白色、凝固的渗出物。肝表面和切面有大小不等的灰黄色或灰白色的坏死点，少数坏死点中间有小出血点。胆囊肿大，充满黏稠的墨绿色胆汁。心外膜和心内膜上有出血斑点，心腔里充满凝固不良的暗红色血液。产蛋母鸭的卵巢滤泡增大，卵泡的形态不整齐，有的皱缩、充血、出血，有的发生破裂而引起卵黄性腹膜炎。病鸭的皮下组织发生不同程度的炎性水肿，在“大头瘟”典型的病例，头和颈部皮肤肿胀、紧张，切开时流出淡黄色的透明液体。

（四）流行病学特征

易感动物：自然易感动物为鸭、鹅、天鹅等水禽，不同品种、日龄均可感染该病，但发病率及病死率有一定差异，其中以家鸭、番鸭、野鸭、鹅、天鹅等易感性较高。在自然感染病例中，以1月龄以上的鸭多见，发病率可高达100%，病死率达95%以上。近些年来，有鹅感染鸭瘟出现大量死亡的报道。自然条件下，野生的雁形目鸭科成员（野鸭、野鹅等）常成为带毒者，而鸡、火鸡、鸽、麻雀和哺乳动物等对鸭瘟有抵抗力，但人工感染2周龄雏鸡可以发病；经鸡胚致弱的鸭瘟病毒对鸭失去致病力，但对1月内雏鸡的毒力大大增强，致死率甚高。

传染源：病鸭、病愈不久的带毒鸭及潜伏期的感染鸭是主要的传染源。被病鸭分泌物、排泄物污染的饮水、饲料、场地、水域、用具、运输工具以及某些带毒的野生水禽（如野鸭）和飞鸟等也可成为本病的传染源。野鸭在感染后1年以上仍能分离到病毒。

传播途径：消化道是主要的感染途径，但也可通过交配、眼结膜及呼吸道等途径感染。该病主要通过水平传播，吸血昆虫可能是本病潜在的传播媒介，目前尚未发现该病有垂直传播。迁徙水禽对病毒起传播作用。人工感染试验，经口服、滴鼻、泄殖腔接种、皮肤刺种、肌内注射、腹腔内注射和静脉注射等途径均可引起健康鸭发病、死亡。

流行形式及因素：本病一年四季均可发生，但以夏秋流行最为严重。在我国南北方发病差异较大；南方发病多，且主要见于春夏两季鸭群放牧及运销旺季；北方发病少，偶见于秋季，这可能与北方地区鸭的饲养数量和饲养方式有关。在购销旺季，由于鸭的大批调运，常使本病从一个地区传至其他地区。

当鸭瘟传入未免疫的易感鸭群后，一般在3～5d出现零星病鸭，再经3～6d发病鸭明显增多，疾病进入流行高峰期。整个流行过程一般为2～6周。若鸭瘟传入免疫鸭群，或不发病，或仅有个别鸭发病，且流行过程较为缓慢。

（五）预防及治疗

尚无特效药物可用于治疗，故应以预防为主。除做好生物安全性措施外，采用鸭瘟弱毒活疫苗进行免疫接种能有效地预防本病的发生。

加强饲养管理，坚持自繁自养。由于鸭瘟的传播速度快、致死率高，一旦传入鸭群可造成巨大的经济损失，因此对该病的防控应给予足够的重视。在该病的非疫区，要禁止到鸭瘟流行区域和野鸭出没的水域放鸭。加强本地良种繁育体系建设，坚持自繁自养，尽量减少从外地，尤其是从疫区引种的机会，防止该病的引入。加强饲养管理，防止带毒野生水禽进入鸭群。

加强检疫、消毒和免疫接种。受威胁地区除应加强检疫、消毒等兽医卫生措施外，易感鸭群应及时进行鸭瘟疫苗的免疫接种。疫苗免疫接种是预防和控制鸭瘟的主要措施，目前国内应用的疫苗主要是鸭瘟病毒弱毒苗。种用鸭或蛋用鸭于30日龄左右首免，以后每隔4～5个月加强免疫1次。3月龄以上鸭免疫1次即可，免疫有效期可达1年。但免疫接种应注意安排在开产前20d左右或停蛋期或低产蛋期间。对于肉用鸭，于7日龄左右首免，20～25日龄时二免。

（六）实验室检测

参照标准：GB/T 22332—2008。

1.病毒分离

（1）材料准备

1）病料的采集　一般在感染初期或发病急性期从濒死期禽或活禽采取。濒死期禽采集肝、脾、脑等组织样品。活禽用灭菌的棉拭子涂抹泄殖腔。带有分泌物的棉拭子放入每毫升含有1000IU青霉素、1000μg链霉素、pH 7.2～7.6的磷酸盐缓冲液中。送检病料置于50%的甘油生理盐水中。

2）病料的保存　采集的样品若在48h内处理，可于4℃保存；否则应放－20℃以下保存。

3）病料的处理　将棉拭子充分捻动、拧干后去除拭子。样品液经3000r/min 4℃离心30min，取上清液作为接种材料。组织样品先用pH 7.2～7.6的PBS制成5～10倍乳剂，3000r/min 4℃离心30min，取上清液作为接种材料。为防止细菌污染，可在样品液中加入青霉素（1000IU/ml）、链霉素（1000μg/ml）、卡那霉素（1000μg/ml），37℃温箱作用30min。进行无菌检验。

4）鸭胚　10～11日龄的非DVE疫苗免疫鸭胚。

（2）实验操作

1）胚胎接种　取经处理并且无菌检验合格的样品，以0.2ml/胚的量经绒毛尿囊膜接种10～11日龄的非DVE疫苗免疫的鸭胚，每个样品接种4～5个胚，于38～38.5℃恒温箱中孵育。72h前每天照胚1～2次，以后每天照胚5次。弃去72h前死亡的胚胎，冻存72～120h内的死胚或活胚。

2）病毒收获　无菌收取72～120h内的死胚或活胚的绒毛尿囊膜和尿囊液，－20℃保存备用。

3）如第一代分离结果为阴性，需盲传三代。

2.PCR

（1）引物

P1：GAG CGT ATT TAG TAG AAA CTG C（上游）。

P2：TGA ATG TTG TGA TTG TTC（下游）。

（2）病毒核酸的抽提

1）组织样品用pH 7.2～7.6的PBS制成5～10倍乳剂，3000r/min 4℃离心30min，上清液作为待检材料。

2）取一支1.5ml的指形管，加入待检胚液或1）中上清液和30μl（20mg/ml）核糖核酸酶，混匀后，室温下作用20min。

3）加43μl 10%的十二烷基酸钠溶液和5μl（10mg/ml）蛋白酶K，42℃水浴温育过夜。

4）加等量的Tris盐酸饱和酚（pH7.6），充分混匀，12000r/min离心5min，小心吸出上层水相于另一个指形管中。

5）加等量的酚-三氯甲烷-异戊醇（25∶24∶1），充分混匀，12000r/min离心5min，小心吸出上层水相于另一个指形管中。

6）加1/10体积3mol/L的乙酸钠（pH5.4）、2.5倍体积预冷的无水乙醇，15000r/min离心20min，弃去乙醇，沉淀用75%的乙醇洗涤1次，真空干燥。用20μl灭菌双蒸水溶解沉淀，－20℃保存备用。

（3）操作程序　取一支0.5ml的指形管，依次加入下列试剂：2.5μl 10×的PCR缓冲液、1.0μl上游引物、1.0μl下游引物、0.5μl DNTP、1.0μl病毒核酸、18.5μl灭菌双蒸水、0.5μl Tag DNA酶，于PCR仪中运行94℃30s、55℃30s、72℃ 30s，25个循环，72℃ 8min，同时设立阳性和阴性对照。

（4）PCR产物的检测　反应结束后，PCR产物于1.2%的琼脂糖凝胶中电泳，每个样品的加样量为5～10μl，同时以100 bp DNA分子质量标准物为参照。50V恒压电泳40min，于紫外灯下观察。

（5）结果的判定　阳性对照在416bp处有一条特异的DNA条带，阴性对照没有目的条带，证明本实验成立。待检样品在相同位置有DNA条带，判为阳性，否则为阴性。