2.2　多糖脱蛋白技术

中药多糖常用除蛋白的方法有Sevag法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法、酶解法和串联阴阳离子树脂法等，为了使中药多糖达到更好的脱蛋白效果，还可以将上述几种方法结合起来使用。只有选择一种适合的除蛋白的方法，才能保证在多糖损失量小的情况下达到更好的脱蛋白效果^{［15～18］}。

2.2.1　Sevag法

Sevag法是常用的脱蛋白方法，根据蛋白质在有机溶剂中变性的原理达到脱除蛋白质的目的。由于采用的有机溶剂的配比不同、多糖溶液与Sevag试剂的配比不同、脱蛋白次数的不同，蛋白的脱除率也不同。夏泉等研究发现三氯甲烷与正丁醇的体积比为5∶1、多糖溶液与Sevag试剂体积比为5∶1、脱蛋白次数为6次，脱蛋白率可达到70.8%，此时多糖的损失最少^［15］。此法反应条件温和，在避免降解上有较好的效果，但是对多糖的含量影响较大，操作也比较繁琐，不适合大量多糖的处理。

2.2.2　酶解法

酶解法（enzymatic hydrolysis）不仅可以脱除多糖溶液中的游离蛋白质，还可以脱除与多糖结合在一起的糖蛋白，一般利用蛋白质水解酶使蛋白质降解，以达到脱除的目的。闫巧娟等选用了5种蛋白质水解酶（木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶以及中性蛋白酶1和2）比较其脱除蛋白的效果，结果发现中性蛋白酶1的效果最好，用酶量为2U·g^-1处理黄芪粗多糖，蛋白脱除率达89.1%^［16］。此法专一性强，不易造成有机试剂的污染，蛋白脱除效果较好。

2.2.3　三氯乙酸法

三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）能使多糖中的蛋白质因变性失活而脱除，而蛋白的脱除率和多糖的损失率均与TCA的用量有着密切的关系。刘志刚等采用正交试验的方法，以5%TCA用量、除蛋白次数和反应时间为因素考察TCA的脱蛋白效果，结果发现当多糖溶液与5%TCA体积比为1∶1、提取2次、静置2h时脱蛋白效果最好^［19］。此法反应较剧烈，应控制好时间，在较低温度下进行，但操作简单、快速，蛋白脱除率也较高，可以进行大量多糖的处理。

2.2.4　三氟三氯乙烷法

三氟三氯乙烷（trichlorotrifluoroethane）为1，1，1-三氟-2，2，2-三氯乙烷，分子式为C₂Cl₃F₃，为无色无味透明易挥发液体，几乎不溶于水，混溶于乙醇、氯仿和乙醚。工业上用作制冷剂、发泡剂、萃取剂及溶剂等，是一种有机化工原料。三氟三氯乙烷脱蛋白方法的原理是利用三氟三氯乙烷可使蛋白质变性的特点，最终多糖不沉淀而使蛋白质沉淀析出而达到分离目的。

三氟三氯乙烷脱蛋白的方法是将1份三氟三氯乙烷加入到1份多糖溶液中搅拌10min，离心后的上清液再按上述方法处理2次即得脱蛋白多糖。

2.2.5　串联阴阳离子树脂法

离子交换树脂是具有网状立体多孔结构的多元酸或多元碱的高分子聚合物，其骨架及性质都很稳定，与酸、碱及某些有机溶剂和一般弱氧化剂都不起作用，对热也比较稳定。其多孔结构骨架上有可电离的、酸性或碱性的可被交换基团，如磺酸基、羧基及季胺基等，正由于这些可被交换基团的存在，使得树脂具有离子交换能力。

离子交换树脂的种类很多，常用的是聚苯乙烯型离子交换树脂。它是以苯乙烯和二乙烯苯聚合而成球形网状结构，其中二乙烯苯是交联剂。离子交换树脂分阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。阳离子交换树脂又分强酸性磺酸基（—SO₃H）和弱酸性（—COOH）；阴离子交换树脂又分强碱性［—N⁺（CH₃）₃Cl^-］和弱碱性（—NH₂、—NH—）。

离子交换树脂内含有一定量的水分，在运输及贮存过程中应尽量保持这部分水。若贮存过程中树脂脱了水，应先用10% NaCl水溶液浸泡，再逐渐稀释，不得直接放于水中，以免树脂急剧膨胀而破碎。阴阳离子树脂法的洗脱剂一般为酸水或碱水。

廖文镇采用“水提醇沉”法从竹荪子实体提取水溶性粗多糖，竹荪粗多糖经阴离子交换树脂、DEAE-Cellulose-52和葡聚糖凝胶G-200色谱分离纯化后得到 DP1 和 DP2 两个组分^［20］。