第二讲　组织脱水

在病理制片中组织经过固定和水洗，含有大量水分，而水与石蜡又不能相混，因此必先用脱水剂渗透到组织中，将组织中水分全部去掉.故脱水是石蜡切片制作中的一个重要环节。组织块脱水是否完全，将直接影响制片效果。在工作中经常发生因脱水不好而出现各种问题，有很多人看轻脱水的重要性，而致使制作失败。本讲将为大家介绍日常工作中组织脱水的规律和技巧。

问题35　脱水剂应如何准确分类？

脱水剂是根据其效果和性质进行分类的，一般我们把它分成非石蜡溶剂的脱水剂 （乙醇、丙酮）和脱水兼石蜡溶剂的脱水剂 （正丁醇、叔丁醇、环己酮、松脂醇、二氧六环）。怎么讲呢？前一类脱水剂是不能与石蜡相溶的，只起到去除组织中水分的作用，还要再经过透明剂的处理才能浸蜡，而后一类脱水剂本身就能与石蜡相溶，既能起到脱水作用，同时也起到了透明作用，经这类脱水剂的处理后，组织可不经透明剂，而直接浸蜡。

问题36　如何正确的使用脱水剂？

这个问题说来既简单又复杂，说它简单是因为我们日常使用最多的脱水剂就是乙醇，那么我们只要掌握好它的使用规律就可以了；说它复杂是因为在不同的组织、不同的体积、不同的染色、不同的实验中只简单使用乙醇作为脱水剂，是不可能达到好的结果的，还要因具体情况而论。这里把组织脱水中的特殊处理技术做个介绍，因为这是比较难以掌握的。

不同的组织脱水剂应这样使用：

1.实质器官组织如肝、肾、脾、肾上腺、甲状腺、甲状旁腺、淋巴结、腮腺、扁桃体、胸腺、胰腺等，这些器官组织都含细胞丰富，在脱水过程中易产生酥脆现象 （细胞过度脱水收缩），所以不适于使用强脱水剂，如无水乙醇，丙酮等，而且在脱水过程中，切忌加热和脱水时间过长。可以使用脱水中性的试剂，如正丁醇、叔丁醇，这样可以保证脱水后这些器官组织不变酥脆。

2.心脏、肺脏、子宫、前列腺、肌肉、舌、阴茎、睾丸、卵巢等器官，对脱水剂有较强的抵抗作用，脱水剂对其作用比较缓慢，不易渗透，所以比较适合用较强的脱水剂，如乙醇、丙酮，或乙醇丙酮的混合脱水剂。

3.胃、肠、膀胱、血管、输卵管、输尿管、阑尾、胆囊、食管等器官，对脱水剂的抵抗作用没有那么强，但由于这些管状器官是由多层不同组织构成，故而脱水剂的穿透性太弱，效果也不会太好，这里建议以乙醇处理为当，其他的脱水剂效果不甚理想。

4.骨、皮、肌腱、椎间盘、软骨、韧带、宫颈等组织，十分致密，硬韧，骨肿瘤穿刺 （脱钙后）、脱水剂很难浸入，故而脱水效果较差，由于这些组织器官，经强烈脱水后，容易变硬，使制片困难，所以使用脱水剂要十分小心，这里推荐使用叔丁醇、正丁醇或二氧六环，因这几种脱水剂作用较为缓慢，同时又有透明作用，省去透明剂的再次硬化作用，能获得较为满意的效果。

5.脂肪组织、脑组织、乳腺组织、骨髓等含脂质较多，不易脱水成功，但并不是强的脱水剂就能更好的处理这些组织，这里建议使用脱水剂前，应先作脱脂处理，乙醇虽有很好的去脂作用，但仍不能达到理想的脱脂脱水要求，最好先用氯仿脱脂后，再进行脱水处理，选用的脱水剂以乙醇、松脂醇为佳。

6.对肿瘤来讲肝癌、肺癌、肾癌、淋巴癌、甲状腺癌、胰腺癌、胸腺瘤、鼻咽癌等细胞较脆，脱水时应采用较温和的脱水剂，如叔丁醇、正丁醇。而像胃癌、肠癌、膀胱癌、卵巢癌、胆囊癌、类癌、食管癌、脑癌及各种肉瘤则应采用较强的脱水剂，如乙醇、或醇丙酮混合脱水剂。子宫肌瘤、平滑肌瘤、血管瘤、纤维瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤、皮肤肿瘤、前列腺癌、宫颈癌、睾丸癌、阴茎癌、乳腺癌则以乙醇作为脱水剂最为合适。

7.胃镜、肠镜、支气管镜、肝穿、肾穿、前列腺穿刺、膀胱镜活检、乳腺穿刺、甲状腺穿刺等小标本，由于体积过小，不可使用强脱水剂，可采用梯度乙醇+正丁醇的脱水方法，可适当延长脱水时间，标本也不会出现脆硬现象。骨髓穿刺可采用梯度乙醇+丙酮的脱水方法，脱水前最好行脱脂处理。

问题37　组织脱水后出现发脆的原因是什么？

脱水过度容易造成组织发脆，造成组织发脆的原因还有加温 （温度超过36℃）、脱水剂内加有丙酮。一般总认为组织发脆跟高浓度乙醇有关，而忽视了与低浓度的乙醇关系，其实低浓度的乙醇具有强大的穿透力，比纯乙醇更容易渗透到组织块内部使之脱水，组织如果在低浓度乙醇里充分脱水，在高浓度乙醇里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水分，因此，仅需短时间就可完成。所谓脱水过度引起组织发脆可能是起始脱水浓度过高引起。如果脱水时加温，使用丙酮，还可引起组织收缩，并影响免疫组织化学的标记。

问题38　影响脱水效果的因素都有哪些？

影响组织脱水效果的因素有很多，通常来讲包括人工脱水操作；全密闭柜式电脑控制自动组织脱水机脱水操作，两种不同程序的脱水，会产生不同的影响因素。首先人工组织脱水法因为每一步都需要人来完成，所以稍有不慎，就会在时间上有所延误，脱水处理时间就不很精准。而自动脱水机操作的问题是，在脱水时，大小组织一窝煮，造成小组织过度处理而产生硬脆的现象，而太大的组织又处理不够，使之难以切成佳片。另外脱水剂加热；取材时组织切取太大、太厚；标本固定不充分；标本组织结构较特殊；脱水液种类选择不当；因脱水液使用过久，使用率又高，引起脱水液被稀释，有效浓度降低等都是影响脱水效果的因素。

问题39　乙醇脱水是最经典的方法之一，为什么有时效果也会不好？

乙醇是很好的脱水剂，它可用在所有的组织脱水程序中，效果也是不错的，但它不是一药治百病的仙丹，它同时也具有很多缺点，正是由于一些误导，大家都把它作为脱水剂的经典，才使得大家都盲目地去使用它，却不顾很多组织是不适于乙醇脱水的，还要强调的是要根据组织的具体情况选用脱水剂，不要盲目的使用乙醇脱水。乙醇再便宜，也要节约，所以在换液时有些操作者舍不得全部倒掉，而采取后缸顶替前缸，只更换最后一缸的做法，这种换液的方法也不能说就不好，只是不要等到试剂已经太过陈旧才换液，那样肯定是严重影响脱水质量的。

问题40　为什么市面上出售的改良脱水套液能够改变以往组织脱水不净的现象？

这个问题在很多专业网站上有很详细的分析，其实这是厂家打的一场心理战，他们知道我们想节省的心理，所以，厂家不会提供可供更换用的最后一道液体，你到时更换试剂，就是再贵，也要全部倒掉，一起更换，这时候我们也就没有心疼的感觉了，这样就达到试剂设定的效果，这里面还包括了固定液、石蜡、苏木素、伊红等，由于都是成套供应的，你必须都得换。这是用沉重的经济代价换来的改变，其实如果我们把日常的脱水规范化，根据组织的具体情况合理使用脱水剂，问题39中那种换液方法还是值得提倡的。

问题41　梯度乙醇对脱水的影响是否不如无水乙醇的影响大？

这个问题很难有准确的答案，有专家进行过探讨和实验，实验证实，在70%、80%、85%、90%、95%、100%乙醇的脱水程序中，80%乙醇中的收缩率最明显；70%乙醇的效果次之；85%、90%和95%梯度乙醇的脱水效果变化较小；而无水乙醇基本没有变化。当不经过低浓度脱水而直接将组织投入到高浓度乙醇中时，组织也会有较明显的收缩率，但是脱水不彻底。不同组织器官比较结果表明：管状器官的收缩率要比实质性器官如肝脏，淋巴结等收缩率要大。通过本试验，发现组织在70%内收缩明显，而在无水乙醇中收缩很小，基本上可以忽略不计；在高浓度乙醇内放置时间加长对进行切片效果无影响，主要是二甲苯透明、浸蜡时间要掌握好。总之，通过本试验结果发现，以往将组织放入70%乙醇中长期保存的办法应该慎重，组织收缩明显，影响测量结果；而在无水乙醇内可以延长时间，使组织脱水彻底。

问题42　骨组织脱水的要点是什么？

因骨组织是最难以处理和掌握的特殊组织，它具有一套特殊的处理技术，是作为病理技师必须掌握的。骨组织的硬度，使以后的步骤难以进行，所以对骨组织使用脱水剂要特别注意，像丙酮、无水乙醇等强脱水剂最好不用，因为这些脱水剂使用后，跟着就必须使用二甲苯等收缩性更强的透明剂，更使骨组织的硬度加大，不利制片。建议采用收缩性稍弱的脱水剂，特别是可兼顾脱水透明双重作用的试剂更好，如正丁醇、叔丁醇、环己酮、二氧六环 （dioxane）等。

1.骨组织一般脱水程序 （表42-1）

2.先固定后脱钙的骨组织可采用以下脱水程序

（1） 程序Ⅰ （表42-2）：

（2） 程序Ⅱ （表42-3）：

（3） 程序Ⅲ （表42-4）：

（4）程序Ⅳ：二氧六环 （dioxane）：它的特点很突出，以上各脱水透明剂均须在各级乙醇之后使用，而二氧六环却可免去各级乙醇处理，而直接入二氧六环中脱水，骨组织在其中可放置很长时间而不会引起收缩和硬化。一般6～8小时后即可直接浸蜡。

3.先脱钙后固定的骨组织脱水程序，经此处理的骨组织膨胀较严重，所以，要采用收缩力较强的脱水剂，如无水乙醇、丙酮等。以无水乙醇2～3小时为佳 （一般大小标本），也可采用无水乙醇-丙酮等量混合2～3小时，尽量不采用纯丙酮脱水，因纯丙酮的脱水力很强，对组织的收缩较大，易使组织变硬。

问题43　皮肤组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的地方吗？

皮肤组织也是比较不好制作的特殊组织，其脱水程序有两种：

1.程序Ⅰ：

常温80%乙醇 （60～120分钟）→95%乙醇Ⅰ （60～120分钟）→95%乙醇Ⅱ （60～120分钟）→无水乙醇Ⅰ （30～60分钟）→无水乙醇Ⅱ （30～60分钟）→无水乙醇Ⅲ （30～60分钟）。

2.程序Ⅱ：

常温80%乙醇 （20～30分钟）→95%乙醇Ⅰ （45～60分钟）→95%乙醇Ⅱ （45～60分钟）→正丁醇Ⅰ （60分钟）→正丁醇Ⅱ （60分钟）→正丁醇Ⅲ （120分钟）。

皮肤组织在取材时，考虑到伤口愈合后的外观，故取材一般较小，1.0cm×0.5cm×0.3cm以内。且皮肤组织含水相对其他组织较少，因而在脱水时，可以缩短脱水时间。普通病理制片手工操作脱水所需时间6～9小时，切片时如果组织易碎，可能原因为脱水过度。

问题44　脂肪组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

脂肪组织的脱水应从低浓度乙醇开始，在无水乙醇中时间应适当延长到4小时左右，使组织彻底脱水，在进二甲苯之前最好在无水乙醇和二甲苯的混合液中处理30分钟效果更佳。如作特染时为保存脂质置于乙醇和二甲苯等溶剂中的时间则宜短。三氯甲烷有很好的脱脂作用，更有利于脂肪组织的脱水和透明浸蜡的效果。

1.脱脂：

三氯甲烷120分钟。

2.脱水：

75%乙醇 （120分钟）→80%乙醇 （90分钟）→95%乙醇 （90分钟）→无水乙醇Ⅰ （60分钟）→无水乙醇Ⅱ （60分钟）→无水乙醇Ⅲ （60分钟）。

问题45　淋巴结的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

淋巴结具有组织结构致密、细胞丰富等组织学特点，其外围有致密结缔组织的被膜包绕。淋巴结的这些组织结构特征就决定了其组织制片较其他组织制片相对难度大。淋巴结的脱水极为重要，稍有不慎就会制作失败，所以，最好不要使用太强的脱水剂，如丙酮等，最好使用较为温和的脱水剂，而适当延长脱水时间是最好的办法。

经典方法：常温80%乙醇 （60分钟）→95%乙醇Ⅰ （60分钟）→95%乙醇Ⅱ （120分钟）→叔丁醇Ⅰ （60分钟）→叔丁醇Ⅱ （120分钟）→叔丁醇Ⅲ （120分钟）。

问题46　肌腱组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

正常肌腱的胶原纤维束平行而整齐紧密地排列，束间有沿其长轴成平行排列的肌腱细胞，肌腱外膜可见成排的腱细胞。肌腱的组织致密，对液体的穿透阻力较大，所以也是较难以制片的组织。

经典方法：常温80%乙醇 （60分钟）→二氧六环Ⅰ （120分钟）→二氧六环Ⅱ （120分钟）→二氧六环Ⅲ （120分钟）。

二氧六环 （dioxane）的特点很突出，以上各脱水透明剂均须在各级乙醇之后使用，而二氧六环却可免去各级乙醇处理，而直接入二氧六环中脱水，肌腱组织在其中可放置很长时间而不会引起收缩和硬化。一般6～8小时后即可直接浸蜡。

问题47　肾穿组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

就肾脏制片的质量而言，病理工作者比较公认的标准为：切片完整且薄；以2μm最佳切片无折叠及刀痕；染色清晰，透明性好，对比鲜明；免疫组织化学或免疫荧光定位准确，背景适中，要达到这样的效果，脱水是关键，肾穿刺组织的脱水不提倡使用自动脱水机，宜手工操作。

经典方法：常温80%乙醇 （60分钟）→二氧六环Ⅰ （60分钟）→二氧六环Ⅱ （60分钟）→二氧六环Ⅲ （60分钟）。

问题48　肌肉组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

在组织病理制片过程中，肌肉组织经常发生组织变硬、变脆、易破碎、易掉片的现象，其原因是组织本身致密、较硬，脱水剂浓度较高、脱水时间较长，脱水不彻底导致的石蜡浸渍不好，肌肉组织是较致密的组织，因而脱水是关键步骤，由低浓度乙醇开始脱水可避免组织过度收缩，也保证了脱水彻底。

经典方法：常温70%乙醇 （60分钟）→80%乙醇 （60分钟）→95%乙醇Ⅰ （60分钟）→95%乙醇Ⅱ （120分钟）→环己酮Ⅰ （120分钟）→环己酮Ⅱ （120分钟）→环己酮Ⅲ （120分钟）。

环己酮脱水透明剂的优点是脱水力较强，又不使组织收缩变硬，更可替代透明剂而直接浸蜡。

问题49　指甲的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

指甲板大部分是角质 （角蛋白），它与构成头发的化学物质是相同的。角质是从氨基酸中产生出来的蛋白质。这些特殊的蛋白质形成了一种坚固的有弹性的物质，称为指甲板。指甲板与皮肤和头发的产生非常相似，它由多层平整的角质细胞构成，这些板状细胞由一种黏性很强的物质互相凝结在一起，当多层细胞互相粘连在一起时，就形成了同灰砖墙相似的构造。指甲板也被称作自然指甲。见于指甲的构造，化学剂很难浸入其中，故而脱水效果大打折扣，如使用强脱水剂不但脱水未达标，反而能强化其坚硬度，故而温和脱水剂才是最好的选择。

经典方法：软化液 （Bouin、Perenyi液或苦味酸饱和液）中软化12～24小时→流水冲洗8～12小时→二氧六环Ⅰ （120分钟）→二氧六环Ⅱ （120分钟）→二氧六环Ⅲ （120分钟）→二氧六环Ⅳ（120分钟）。

有人主张采用苯酚作软化剂，但苯酚对一般的硬组织效果较佳，但对于指甲这种含胶质很多的物质就作用不大了，二氧六环的特点是可不经各级乙醇而直接脱水，且可放置较长时间而不会造成组织硬化，在二氧六环液内最好放置一层硫酸铜，以达吸水作用。

问题50　眼球的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

由于构成不同，眼球内各种组织软硬相差很大，各层次之间连接性较差，因此用常规方法很难作出结构完整的全眼球病理切片，所以，眼球的切片制作需要特殊的方法才能完成。

经典方法：温80%乙醇 （120分钟）→95%乙醇Ⅰ （120分钟）→95%乙醇Ⅱ （120分钟）→95%乙醇Ⅲ （120分钟）→正丁醇Ⅰ （120分钟）→正丁醇Ⅱ （120分钟）→正丁醇Ⅲ （120分钟）→正丁醇Ⅳ （120分钟）

此法中采用正丁醇作为脱水透明剂，因其对组织的收缩和硬化很小，脱水透明可同时进行，故而对眼球的处理效果较佳。

问题51　需软化处理的组织的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

在制片过程中如措施不适当，使组织未经固定而干枯或因固定不当久而硬化，这类标本已失去检查价值，但必要切片时，还可设法使之软化，权宜使用。

经典方法：将预处理组织入20%安替弗明液 （Antiformin，氢氧化钠7.5g，碳酸钠70g，漂白粉100g，氯酸钠溶液1000ml）或5%苯酚液软化处理24～48小时，直至组织膨胀→软化适宜时取出用流水冲洗→二氧六环Ⅰ （120分钟）→二氧六环Ⅱ （120分钟）→二氧六环Ⅲ （120分钟）。

问题52　烧伤皮肤的具体脱水方法是怎样的？有些什么特殊的要求吗？

烧伤皮肤呈焦硬状态，再经组织脱水、透明、浸蜡等处理后就会变得更加坚硬，很难制出较好的切片，已成为比较难以解决的问题，但也不是任何办法都没有，采用一些特殊的方法也还能得到较好的效果。

经典方法：A.G.M固定液 （70%乙醇80ml+冰醋酸10ml+甲醇10ml）固定24～48小时→4%苯酚水溶液内2～3天→常温80%乙醇 （60分钟）→95%乙醇Ⅰ （60分钟）→95%乙醇Ⅱ （60分钟）→叔丁醇Ⅰ （60分钟）→叔丁醇Ⅱ （120分钟）→叔丁醇Ⅲ （120分钟）。

问题53　怎样判断是否是脱水出了问题？什么样的现象说明是脱水出的问题？

这两个问题都是组织制片当中经常遇到的问题，其实这既是两个不同的问题，也是同一个问题的两个方面。首先第一个问题是说脱水与固定、透明、浸蜡之间出现的问题怎样区分，第二个问题是说脱水本身出现问题怎样判断，其实我们只要掌握了脱水问题的判断标准，也就能很好的区分其他操作过程的问题了。脱水出现的问题是应该很好判断的，因为如果脱水不好，标本出现的只能是两种情况：一种是脱水不足，组织在包埋蜡块中呈现与石蜡硬度不一的现象，结果是虽能切出蜡带，但蜡带中组织不成片，这是因为脱水不净，使得透明剂与石蜡都无法浸入组织当中，故而形成了没有浸蜡的组织蜡块；另外一种是脱水过度，组织因为脱水过度 （脱水剂太强，脱水温度过高、脱水时间太长等）致使组织细胞结构发生不可逆的变化，即使透明剂和石蜡都顺利浸透组织，但因组织本身已遭破坏，切出的片子也是很糟糕的，呈现组织细胞碎裂，收缩变形的现象。

问题54　不同温度下的脱水对组织中酶活性有什么影响？最佳的酶活性组织脱水温度是怎样的？

组织固定对组织酶的活性的影响较大，主要集中在不同固定剂对一些水解酶活性的影响，而组织脱水的温度对酶活性的影响也不容忽视。因此，本文要讲一下脱水时的不同温度对组织中酶活性的影响，从中给出酶活性的最适脱水温度。

1.影响：

实际应用所取得的结果证实，低温组织切片中酶活性呈强阳性反应，明显高于较高温组织切片中的酶活性。高低温度差别显著，同时又因脱水温度不同，其切片中酶活性显著结果略有差异，但不显著，表明是低温脱水较高温脱水的组织切片能更好地保存酶活性。考虑到实际工作的条件，笔者认为组织以-20℃脱水为宜。

2.方法：

组织在4℃固定后，洗去组织内残留的甲醛，在-20℃下脱水，乙醇浓度应不低于95%（否则易结冰）。也可用无水乙醇直接脱水，其时间应视组织块大小灵活掌握，均应数倍于常温脱水时间。

问题55　病理细小质嫩的穿刺组织行脱水时极易出现脱水过度的情况，如何掌握？

由于各种穿刺活检组织及小动物内脏组织标本小，组织稚嫩，质地柔软易碎，标本珍贵等特点，如果按照常规标本的处理方法，往往容易造成组织过度收缩脆裂失去柔韧性，切片时呈碎渣样，不能完整制片，甚至无法制片，现在介绍一种解决方法：

1.收到标本后，立即置于中性缓冲甲醛固定液中，如果标本过小，可先点上伊红后用擦镜纸包起来放在固定液中固定，可防止组织丢失。固定液要保持新鲜、液量要求充足，固定时间为1～12小时。

2.脱水处理：75%乙醇30分钟→85%乙醇50分钟→90%乙醇Ⅰ50分钟→95%乙醇Ⅱ90分钟→95%乙醇Ⅲ90分钟→无水乙醇Ⅰ90分钟→无水乙醇Ⅱ90分钟。

问题56　微波在组织脱水中如何使用？

微波技术在病理技术中的应用，主要是根据微波能发射高频能量，组织经微波辐射后会加速内部分子的高速运动，加快组织固定、脱水等过程，提高其染色质量，病理技术工作的效率大大提高。这一方法尤其适合于临床病理的快速诊断，可减少误诊率，对提高病理工作的质量具有重要意义。但在应用微波的过程中也要严格控制微波温度由于各器官组织材料自身特点不一，电子密度也不完全相同，使用的时间也不完全相同，这就需要我们不断总结经验加以提高。

方法：将已隔夜固定的组织材料分别放入2瓶95%乙醇中置入7挡微波炉中，时间分别定为15～20分钟，再将组织材料分别放入2瓶100%乙醇中置入7挡微波炉中，时间分别定为15分钟。将组织材料取出，放入透明剂中。

问题57　微小组织脱水时有什么好的脱水方法吗？

随着医学科学的迅速发展，在日常的病理标本中，微小组织活检已占相当大比例。如内镜活检、粗针或细针穿刺吸取活检、钳取活检等。因所取的组织微小。常规制片过程时间较长。而用快速石蜡切片组织又收缩较明显，给病理诊断带来影响。如采用离心机进行微小组织高速离心脱水制片，简易适用，速度快，当日可出报告，可取得较满意的效果，现介绍如下。

1.材料：

①离心机：转速可达到3000～4000r/min，1分钟离心即可。②试剂：固定液 （浓甲醛15ml、95%乙醇80ml、冰醋酸5ml）。无水乙醇，正丁醇。③天平，眼用镊，擦镜纸。④试管：用12mm（直径）×100mm（高）试管 （华氏管）。在试管内底部垫一小片海绵做过滤吸水用。

2.方法：

用擦镜纸将微小组织与标签编号包好，用眼用镊夹入试管内，加入固定液约11～12ml。经天平平衡后，用蜡笔做好容积记号，放入离心机以3000～4000r/min，离心3～5分钟。然后取出标本放在吸水纸上吸干标本上余液，再将标本放入原试管，注入无水乙醇至原记号，进行离心5分钟。按上述方法再注入正丁醇离心5分钟。至此，固定、脱水、透明结束。

问题58　有没有可在几小时内完成脱水程序的方法？以方便门诊标本的快速病理诊断？

快速脱水方法可缩短门诊患者的诊查时间，方便患者。也不受条件设备限制，特别适合在中、小医院内开展，介绍一种方法。

1.方法：

送检标本大小一般要求在0.6cm×0.4cm×0.4cm。若组织块稍大，在中间切开即可。脱水过程均需在温箱内进行，温箱内温度要保持在50～60℃，各缸分别放入加温：95%乙醇30分钟，无水乙醇60分钟→二甲苯Ⅰ15分钟→二甲苯Ⅱ30分钟→硬脂酸石蜡液内浸泡60～90分钟 （硬脂酸2份、石蜡2份，或医用石蜡均可）。

2.效果：

①脱水后组织质地硬度适中，无变脆变硬现象。对皮肤，淋巴结亦可收到满意效果。②脱水后染色及制片无需特殊处理，操作方便。③逐缸加温，药物不致大量挥发，程序简捷。④经对多年用此方法脱水制作的切片复查，其色泽稳定，说明可长期保存。

问题59　在特殊情况下，有没有一种更快捷的组织脱水方法，以解燃眉之急？

对于各科送检的病理标本，从满足临床需要出发，应尽量缩短制片时间，以便更好地为患者服务，在特殊情况下，有时需要在最短的时间内发出病理报告，可以采用真空脱水法。

1.常规真空组织脱水器械：

①医用电动吸引器一台，规格要求 （真空度为700毫米汞柱，排气量为30L/分钟。单相电动机，电压为220V，功率为180W，转速为1400转/分钟）。②玻璃瓶6个，胶塞一个，16号针头1支，70cm长的胶管一条，把针头插入胶塞，将橡皮管套上针头，另一节橡胶管套上电动吸引器。

2.使用方法：

①将已固定的送检组织用锐利刀片切成1.6cm×1.5cm×0.15cm大小，装在脱水篮或脱水盒子里，置入瓶Ⅰ内约300m l 80%乙醇溶液中，用胶塞塞紧瓶口，开动吸引器使负压表指针达650毫米汞柱，用止血钳钳住胶管，关闭机器，使瓶内组织真空脱水10分钟。②将脱水篮从瓶Ⅰ直接移入瓶Ⅱ中，按上述操作抽气真空脱水10分钟。③以下各瓶依次进入透明：Ⅰ、Ⅱ瓶真空各6分钟。浸蜡：入石蜡，二甲苯混合液Ⅰ10分钟，石蜡Ⅱ、Ⅲ各15分钟，然后进行包埋。

此法操作方便、设备简单，可适用于城乡医院病理科，解决门诊急待诊断的送检标本 （如远道来就诊的患者）。过去病理诊断要3天才能报告结果，用此法只要12～24小时。

问题60　含蜡组织块脱水不足如何补救？

含蜡组织块脱水不足是指处理病理标本时组织块脱水不尽而被浸蜡甚至包埋，以致石蜡不能完全浸透组织，失去应有的支持作用。此常见于全自动组织脱水机的组织处理过程，因其是无人值守操作，所以一旦发现脱水不足，组织块往往已经浸蜡。考虑到再取材工作量巨大，加之内镜、穿刺等标本再取材困难，对组织进行补救处理显得尤为必要。组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡，表现为含蜡组织块发软，制成蜡块后组织块与周边石蜡容易发生脱离，此种蜡块往往难以切出组织薄片或即使强行切出也会出现组织挤压、破碎，影响病理诊断。对上述含蜡组织块进行补救性处理，是个很棘手的问题，实践证明将此类组织块用二甲苯多次脱蜡后，入逆梯度乙醇直至水化，再重新脱水，实际效果甚微。下面就介绍一种方法，可基本解决这一问题。

1.操作方法

（1）将全自动脱水机或手工处理后有明显脱水不足现象的已浸蜡样本蜡块放入60℃石蜡溶液中，使组织周围石蜡完全溶解，保持组织块内石蜡成分处于溶融状态。同时，在75℃水浴槽内先后放入盛有30ml丙酮的烧杯A （50ml容积），加热丙酮 （隔段时间再加热盛有30ml丙酮的烧杯B）。

（2）待丙酮A完全沸时，放入组织块，此时丙酮内逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现，组织块有液泡冒出。

（3）当丙酮B完全沸时，迅速将组织块从A丙酮换入其中，处理10分钟，此时丙酮内石蜡沉淀明显减少，组织块仅有少量或无液泡冒出。

（4）取出组织块，立即投入75℃石蜡溶液中，直至组织块无气泡冒出，约15分钟。

（5）常规包埋、切片、HE染色。

2.效果：

经此法处理，组织块硬度有所增加，所制备蜡块容易切出薄片，组织无挤压，HE染色颜色艳丽，结构清楚。

3.本法的理论基础为

（1）丙酮和石蜡不相溶，此特性保证了彼此单向置换，即以丙酮为溶液时，石蜡被置出；以石蜡为溶液时，丙酮被置出。

（2）以75℃作为脱蜡与浸蜡的适宜温度，远高于丙酮沸点 （56～57℃）及石蜡溶点 （58～60℃），能使丙酮与石蜡有效而快速地进行单向置换。

（3）丙酮作为一种快速脱水剂，目前主要用于快速石蜡切片的制备，适宜温度亦为75℃。

4.注意事项

（1）对已包埋的蜡块，应事先融溶。

（2）组织块投入A、B丙酮时，应及时迅速，以防石蜡凝结导致置换失败。

（3）A、B丙酮放入水浴槽的时间差实为A丙酮的处理时间。实际操作中，可视组织块体积大小或数量多少酌情调整A、B丙酮处理时间。

问题61　脱水剂使用当中应注意的问题有哪些？

1.首先脱水方法甚多，但不论哪种方法最重要的是不应骤然进行，不能操之过急，否则会引起组织强烈收缩或是组织发生变形，而得不到满意的结果。一般要把脱水剂配成各种不同浓度，自低到高浓度循环进行，经过各级浓度的脱水剂使组织中的水分逐渐减少，而代之以脱水剂，只有脱水剂把组织中的水分彻底脱去，才能得到较好的效果。

2.乙醇脱水能力强，但易引起组织收缩、变脆，主要原因是脱水时间过长或加温时温度过热，对小块组织、柔软的结缔组织可从30%浓度开始，其中柔软组织在95%乙醇中的时间要长一些。脱水时间应根据组织块的大小、性质和类型分别进行，为使组织脱水彻底，应该注意脱水必须在有盖子的容器内进行，尤其是高浓度乙醇很易吸收空气中的水分，阴雨天、空气湿度较大的天气时更应注意。

3.丙酮脱水作用比乙醇强，但对组织的收缩也比乙醇要大故而一般的组织很少使用，主要用于快速脱水，脱水时间一般为1～3小时。

4.正丁醇脱水力较弱，其最大优点是很少引起组织的收缩与变脆，一般脱水时间在12～24小时左右，可直接浸蜡，因其使用中易挥发，并有一定气味，故使用时应注意安全。

5.叔丁醇优于正丁醇，不会使组织收缩变脆，亦可直接浸蜡。

6.环己酮与叔丁醇相仿，不会使组织收缩变脆，亦可直接浸蜡。

7.松脂醇，此液几乎不溶于水，但可溶于醇和醚，使用时组织经各级乙醇，然后按下列顺序继续进行脱水处理：①进入95%乙醇和松脂醇的等量混合液中，待组织下沉后转入下液。②95%乙醇1份+松脂醇2份的混合液中，浸泡1小时。③95%乙醇1份+松脂醇3份的混合液中，浸泡1小时。④松脂醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，各浸泡1小时。

8.二氧六环：其优点甚为突出，组织经固定后，不必经各级乙醇，可直接入二氧六环中脱水，不会使组织出现明显收缩、硬化。因其具有毒性，所以使用时要格外注意安全。

9.如使用自动脱水机进行脱水操作，需注意以下几点：首先脱水时间一定要严格，在时间上其他溶液可以做适当调整，但脱水必须严格，不得随意加减时间；当需进行加热时 （冬季）应在脱水剂程序保持常温状态 （37℃），不得随意加大温度；有些脱水机有搅拌功能，此功能确实对脱水有帮助，可以考虑尽量应用；另外脱水剂的量一定要大于标本体积的5倍以上，最少也不能低于此数；当发现切片质量有所下降时，应尽早更换新液。