4.3 接种

接种前1h打开接种室或超净工作台内的紫外灯，照射30min。紫外灯开启后人必须离开，因为强烈的紫外线伤害人的眼睛和皮肤，紫外线照射氧气产生的臭氧（O3）伤害呼吸系统。紫外灯开启后也不能将植物材料放在它照射的范围内，以免引起突变。关闭紫外灯后，打开超净工作台的气泵吹风15min以除去紫外线照射所产生的O3并使无菌空气充满超净工作台。准备进行接种的工作人员必须先用肥皂洗手，接着用70%～75%乙醇浸湿的棉球将手擦净，然后再用浸透0.1%的苯扎溴铵（benzalkonium bromide）溶液的纱布擦拭超净工作台的台面，再接着用浸透70%～75%乙醇的脱脂棉擦拭。随后将实验所需各类无菌器材摆放于不影响无菌过滤空气通道的侧面，为无菌操作做好准备。在无菌操作期间必须使气泵连续工作。

将经过消毒和无菌水洗涤的植物材料放置于垫有滤纸的无菌培养皿中，加少许无菌水润湿滤纸。取一50mL的无菌烧杯，倒入半杯无菌水，用于冷却操作过程中烧热的镊子和解剖刀。在接种室或超净台上用无菌镊子取出已消毒并用无菌水洗涤过的植物材料，放入垫有滤纸的无菌培养皿内。在酒精灯火焰上灼烧解剖刀，用无菌水降温后切去末端切口附近被消毒剂浸透的部分。再根据需要将植物材料切成小块。用无菌镊子将这些小块转移到含培养基的培养皿或锥形瓶内，这些用作培养物的小块就是外植体。给培养皿或锥形瓶加封口膜后放置于培养架上。根据外植体的种类和特性放于光照下或暗处培养。

接种时仍然要严防污染。要注意无菌空气的吹向，在进风口不能存放非无菌器皿；操作者最好戴上口罩，以免呼吸道排出的微生物进入培养皿；注意培养基表面不能积水，防止微生物随水流扩散。每切割几次或转移几块材料后须灼烧解剖刀或镊子。灼烧要到火候，特别是第一次接种时，凡伸入培养瓶的部分都必须充分灼烧。